viernes, 16 de agosto de 2019
martes, 13 de agosto de 2019
''MICROFLORA NORMAL DEL CUERPO HUMANO'' Cap 10
Microflora normal
del cuerpo humano
La investigación ha demostrado que esta
“flora normal” ahora conocida como “microbiota normal” proporciona la primera línea de defensa contra los microorganismos patógenos, ayuda a la digestión, participa en la degradación
de toxinas y contribuye a la maduración del sistema inmunitario. Los cambios en esta microbiota normal, o la inflamación
que incitan estos comensales, generan enfermedades como la
enfermedad inflamatoria intestinal.
PARTICIPACIÓN DE LA MICROBIOTA
NATURAL
Los microorganismos que permanecen constantemente en las
superficies del cuerpo son comensales. Su presencia en determinada área depende de ciertos factores fisiológicos como temperatura, humedad y determinados nutrientes y sustancias inhibidoras. Su existencia no es indispensable para la vida, puesto
que es posible criar animales “sin gérmenes” en ausencia completa de flora microbiana normal. Sin embargo, la flora natural
de ciertas áreas tiene una función importante para conservar la
salud y la función normal.
MICROBIOTA NORMAL DE LA PIEL
La piel, al encontrarse expuesta constantemente al ambiente y
en contacto con el mismo, es un medio idóneo para la permanencia de microorganismos transitorios. Sin embargo, hospeda
a una flora natural constante y definida que es modificada en
distintas regiones anatómicas por las secreciones, el uso de ciertas prendas o la proximidad a las mucosas:
MICROBIOTA NORMAL DE LA BOCA
Y VÍAS RESPIRATORIAS SUPERIORES
La flora de la nariz consta principalmente de corinebacterias, estafilococos. Frecuentemente las mucosas de la boca y faringe son estériles al nacimiento, pero se contaminan al atravesar el canal del
parto. En las primeras 4 a 12 h después del nacimiento, el estreptococo viridans se establece como el miembro principal de la
flora normal y lo sigue siendo por toda la vida. Quizá se origina
en el aparato respiratorio de la madre y las personas que la atienden.
Las infecciones de la boca y aparato respiratorio por lo general son causadas por flora buconasal mixta, incluidos anaerobios.
Las infecciones periodontales, abscesos peribucales, sinusitis y
mastoiditis por lo general son causados por P. melaninogenica,
Fusobacteria y Peptostreptococci
MICROBIOTA NORMAL DEL INTESTINO
Al nacimiento, el intestino es estéril, pero poco después se introducen microorganismos con el alimento. En los niños alimentados al seno materno, el intestino contiene un gran número de
estreptococos productores de ácido láctico y lactobacilos. Estos
microorganismos aerobios y anaerobios, grampositivos e inmóviles (p. ej., especies de Bifi dobacterium) producen ácido a partir
de carbohidratos y toleran un pH de 5.0. En los niños alimentados con biberón, existe una fl ora más mixta en el intestino y
los lactobacilos son menos predominantes. Conforme los hábitos alimentarios adquieren el patrón del adulto, la fl ora intestinal cambia. La alimentación repercute signifi cativamente en la
composición relativa de la fl ora tanto intestinal como fecal. El
intestino del recién nacido en cuidados intensivos tiende a estar colonizado por enterobacterias como Klebsiella, Citrobacter
y Enterobacter.
En el colon del adulto sano, entre 96 y 99% de la flora
bacteriana consta de anaerobios: especies de Bacteroides, especialmente Bacteroides fragilis; especies de Fusobacterium;
lactobacilos anaerobios, por ejemplo bifi dobacterias; clostridios (Clostridium perfringens, 103
a 105
/g) y cocos anaerobios
grampositivos (especies de Peptostreptococcus). Sólo 1 a 4% son
aerobios facultativos (bacterias coliformes gramnegativas, enterococos y pequeños números de proteus, pseudomonas, lactobacilos, candida y otros microorganismos). La fl ora fecal normal
contiene más de 100 tipos distintos de microorganismos, que se
pueden cultivar en forma sistemática en el laboratorio. Quizá
existen más de 500 especies de bacterias en el colon y muchas
más que probablemente se desconocen. Un traumatismo menor (p. ej., sigmoidoscopia, colon por enema) induce una bacteriemia transitoria en 10% de los procedimientos
MICROBIOTA NORMAL DE LA URETRA
La porción anterior de la uretra en ambos sexos contiene un pequeño número del mismo tipo de microorganismos encontrados en la piel y perineo. La orina de la micción normal contiene
aproximadamente 102
a 104
/ml de estos microorganismos.
MICROBIOTA NORMAL DE LA VAGINA
Poco después del nacimiento, aparecen lactobacilos aerobios
en la vagina y persisten siempre y cuando el pH permanezca
ácido (varias semanas). Cuando el pH se neutraliza (permanece
así hasta la pubertad) la fl ora es mixta a base de cocos y bacilos. Durante la pubertad, reaparecen los lactobacilos aerobios
y anaerobios en gran cantidad y contribuyen a mantener el pH
ácido al producir ácido a partir de carbohidratos, en especial
glucógeno. Aparentemente este es un mecanismo importante
para prevenir el establecimiento de otros microorganismos potencialmente nocivos en la vagina.
Después de la menopausia, el número de lactobacilos disminuye de nuevo y se restablece una fl ora mixta. La
flora vaginal normal comprende estreptococo del grupo B hasta en 25% de las mujeres en edad reproductiva. Durante el parto,
el producto adquiere al estreptococo del grupo B, que posteriormente genera septicemia neonatal y meningitis.
MICROBIOTA NORMAL
DE LA CONJUNTIVA
Los microorganismos que predominan en la conjuntiva son
dift eroides, S. epidermidis y estreptococos no hemolíticos. Con
frecuencia también existen Neisseria y bacilos gramnegativos
similares a Haemophilus (especies de Moraxella). La fl ora conjuntival normalmente es regulada por la circulación de lágrimas,
que contienen lisozima antibacteriana.
martes, 6 de agosto de 2019
HEMOCULTIVO
HEMOCULTIVO
El hemocultivo consiste en el cultivo de una cierta
cantidad de sangre de un paciente. La
sangre es un líquido orgánico estéril, y por tanto, el hallazgo de
microorganismos en ella indicará que existe infección, generalmente de carácter
grave.
OBTENCION DE LA
MUESTRA.-
Cantidad de
muestra y número a tomar
Dependerá siempre de la edad y circunstancias del
paciente. Si el paciente es un recién nacido bastara con tomar dos muestras de
1-2ml. De sangre respectivamente para diagnosticar una sepsis neonatal.
·
Uno que cursa con bacteriemia continua (fiebre en meseta),
características de determinadas infecciones intravasculares como endocarditis o
de periodos agudos de infecciones que afectan que afectan al sistema
reticuloendotelial.
·
El segundo cuadro
clínico seria aquel en que la bacteriemia
es intermitente, con fases apiréticas y periodos de fiebre. En este caso lo
ideal sería extraer 10ml de sangre antes de que el paciente fuera sometido a
tratamiento. Si esto no es posible, entonces se procurará extraer sangre del
paciente, cuando empiece a tener síntomas de fiebre pudiendo repetirse la toma
de muestra.
Preparación de la
piel
Si no hay otra indicación, la toma de muestras se
efectúa de la vena que pasa superficialmente por la parte interna de la flexura
del codo.
Es condición indispensable el limpiar previamente la
zona de alcohol de 70°, desinfectándola seguidamente la zona con alcohol yodado
al 2 por 100. Ambas acciones pueden ser sustituidas por una correcta aplicación
de povidona yodada. Esta misma acción desinfectante se repetirá sobre el tapón
de goma que cubre el frasco de hemocultivo, manteniendo su contacto por lo
menos durante un minuto.
Después de la extracción de sangre se taponara la
herida con un algodón empapado en
alcohol de 70° y cuando haya parado la hemorragia, se limpia el resto de
alcohol yodado con alcohol etílico o isopropanol diluidos. Las tiras de
esparadrapo colocadas directamente sobre la piel pintada con yodo pueden
originar inflación.
Toma de muestras
Puede efectuarse con aguja y jeringa, o con los
instrumentos de doble aguja que existen comercializados especialmente para este
fin.
Ante una bacteriemia de origen desconocido es
conveniente tomar dos muestras e incubarlas aeróbicas y anaeróbicamente.
Es importante el segundo caso la forma de introducir
la sangre en el frasco, procurando que no exista aire dentro de la jeringa y
que la inoculación se detenga antes de que el embolo toque el fondo, o cuando
todavía quede sangre dentro del tubo que une el sistema de las dos agujas.
De esta forma se evitara introducir aire extraño y se
conservará el ambiente anaerobio que existe dentro de las botellas (potencial
de óxido-reducción inferior a 100 mv.), conseguido en muchos casos gracias a la
adicción de 0,05 por 100 de cisteína.
METODOLOGÍA
Composición de los
medios de cultivo
La botella destinada a hemocultivo debe contener tal
cantidad de líquido nutritivo que, al
añadirle la sangre, esta represente como máximo el 10 por 100 total.
La atmosfera de incubación solo afectará en el caso de la anaerobiosis a
que el medio sea producido e incluya un reductor que mantenga el potencial de
óxido-reducción suficientemente bajo. En las demás características será igual
al destinado a incubación aerobia, incluyendo sustancias nutritivas, CO², vacío
y un buen anticoagulante.
Para algunos aerobios estrictos, el vacío puede
representar un inconveniente. Un buen método para evitarlo es dejar entrar aire
a través de una aguja que sostenga un algodón estéril en la punta, hasta
igualar ambas presiones.
Procesamiento de
las muestras
Una vez tomada la muestra, se incubaran los frascos a
35°C durante el tiempo que sea necesario. Si se sospecha que el paciente tiene
una brucelosis, la incubación de la muestra puede prolongarse por espacio de
tres a cuatro semanas.
En otros casos los frascos se examinarán diariamente
en busca de alguna señal que indique crecimiento. Es útil observar los
hemocultivos con luz transmitida para comprobar aumento de turbidez, producción
de gas, hemolisis o grumos depositados en el fondo. Si macroscópicamente se
comprueba alguna señal que evidencia la existencia de microorganismos, se
procederá a teñir una gota de líquido y a subcultivar otra en medios enriquecidos. Se mejora
enormemente la visualización de los gérmenes cultivados.
A pesar de todo hay algunos microorganismos, como Haemophilus infuenzae, Streptococcus
pneumoniae, Bacteroides, Fusobacterium, Neisseria meningitidis, etc… que
crecen en el fondo del frasco, sin apenas producir turbidez en el líquido. Para
que estos microorganismos no pasen por desapercibidos, se debe incluir una
serie de resiembras sistemáticas a partir de hemocultivo inicial.}
Interpretación de
resultados
El aislamiento de un reconocido patógeno como un
meningococo o un neumococo del seno de un hemocultivo, establece un diagnostico
inapelable; sin embargo, el subcultivo de microorganismos que habitualmente
crecen sobre la piel, como Staphylococcus
epidermidis o determinados difteromorfos, pueden hacer que el microbiólogo
dude acerca de su patogenicidad.
BACT/ALERT.- Este es un equipo de laboratorio automatizado de
detección microbiana con ventajas en cualquier dimensión del análisis de
hemocultivos desde la seguridad y el diseño hasta la recuperación y
precisión. Ofrecen unos entornos óptimos para la recuperación de
una amplia gama de microorganismos, incluyendo bacterias, hongos y
micobacterias. Todo ello a través de una plataforma innovadora e individual que
ofrece el sistema disponible
más compacto, modular y flexible.
CULTIVO DE BACTERIAS
CULTIVO DE BACTERIAS
Para estudiar las reacciones
metabólicas y fisiológicas de las bacterias es necesario cultivarlas en medios
de cultivo. El desarrollo de una bacteria en un medio de cultivo depende de una
serie de factores los más destacables son:
La
composición
El
pH
La
presión osmótica
El
potencial redox
La
hidratación
La
temperatura
La
atmosfera
ü
Medios selectivos
Son las que se utilizan para
inhibir por completo el crecimiento de bacterias distintas a las que se quiere
aislar y que están presentes en la muestra. La selectividad del medio se
consigue por la adición de sustancias como las sales biliares que inhiben las
formas cocaceas gran positivabas o la azida sódica que solo permite el
crecimiento de cocos Gram positivos. Los antibióticos son otras sustancias q
transforman los medios de cultivo selectivos.
ü
Medios de enriquecimiento
Favorecen el crecimiento de
algún tipo de bacterias que se encuentra en forma minoritaria en una mesclas de
varios grupos bacterianos.
ü
Medios de diferenciación
Se utilizan para poner en
manifiesto a las bacterias que dan positiva alguna prioridad bioquímica y que
están presentes en una mescla.
ü
Medios de identificación
Son aquellos que se utilizan
para estudiar la acción de un solo tipo de bacterias frente a un determinado
sustrato.
ü
Medios de multiplicación
Poseen una composición
determinada y óptima para el grupo de bacterias a las que va destinado.
ü
Medios de conservación
Son aquellos cuya composición
favorece el mantenimiento de los de los microorganismos que en él se siembran y
que posteriormente se incuban a +2 o +4° C.
Antiguamente se clasificaba a
los medios de cultivo por su composición distinguiéndose tres tipos de medios
de cultivo:
-Medios naturales o empíricos
-Medios sistemáticos
-Medios semisinteticos
Medios
de cultivo
Medio de transporte de Amies
Es una modificación de medio
STUART en el que se ha sustituido el glicerofosfato por un tapón de fosfato
inorgánico y adicionado carbón vegetal.
Medio de Baird-Parker
Es un medio utilizado para el
aislamiento y diferenciación de Staphylococcus. Las colonias de Staphylococcus
aureus aparecen sobre el medio negras brillantes, convexas y rodeadas de un
halo claro de 2 a 5mm de diámetro aproximadamente.
Agar Biggy
Es un medio utilizado para el
aislamiento y diferenciación de las especies del genero Candida.
Agar base de Brodet-Gengou
Es un medio enriquecido con
sangre que se utiliza para el aislamiento de las especies del genero Bórdatela.
Agar Brúcela
Es un medio utilizado para el
cultivo de Brúcela y otros microorganismos exigentes.
Agar Butzier
Es un medio selectivo
utilizado para el aislamiento de Cmpylobacter. La selectividad el medio la
proporciona la adición de antibióticos.
Agar carbón extracto de lavadura
Es un medio de cultivo enriquecido
utilizado para el cultivo de Legionella pneumophila.
Medios de transporte de Cary y
Blair
Es un medio de transporte
recomendado para muestras fecales y específicamente para anaerobios.
Caldo cerebro-corazón
Es un medio liquido
especialmente adaptado para el crecimiento de microorganismos exigentes. Es un
excelente caldo para hemocultivo.
Agar cetrimida
Es utilizado para
el aislamiento de Pseudomonas que favorece la pigmentación de Pseudomonas
aeruginosa.
Agar Cled (cistina, lactosa,
electrolito deficiente)
Es un medio no inhibidor,
indicado para el cultivo y recuento en placa de bacterias procedentes de la
orina.
Agar Columbia
Es un medio básico enriquecido
que se utiliza para el cultivo de microorganismos exigentes y como base para la
preparación de agar sangre y agar chocolate.
Agar Champman manitol
Es un medio selectivo para el
aislamiento de Staphylococcus, basado en la tolerancia que poseen a una alta
concentración de cloruro sódico.
Agar chocolate
Es un medio utilizado para el
crecimiento de microorganismos exigentes.
Se prepara a partir de un agar
sangre recién preparado y sin solidificar (50°C) que se incluye durante diez
minutos en un baño maria previamente esterilizado a 80°C.
Agar AMB (agar con eosina y
azul de metileno)
Es un medio de diferenciación
desarrollado por Levine, que se utiliza para el cultivo de Enterobacteriaceae.
Agar de Feeley-Gorman
Es un medio de cultivo
enriquesido utilizado para el aislamiento de Legionella pneumophilia.
Medio de Francis
Es un agar sangre con cistina
y glucosa utilizadp para el cultivo de francisella.
Caldo GN de Hajna
Es un medio de enriquecimiento
para Salmonella y Shigella.
Medio HBT
Es un medio selectivo
utilizado para el aislamiento de Gardnerella vaginalis.
Agar Hektoen
Es un medio diferencia
selectivo especialmente indicado para el aislamiento de Salmonella y Shigella.
Medio de Loeffler
Se utiliza para el cultivo de
Corynebacteriun y otros microorganismos exigentes. Asi mismo como se pone en
evidencia la cromogensis y poder proteolítico de ciertas bacterias.
Medio de Lowenstein-Jensen
Es un medio utilizado para el
cultivo de Mycobacterium.
Agar MacConkey
Es un mdeio selctivo
diferencial utilizado para el cultivo de Enterobacteriaceae.
Los organismos fermentadores
de lactosa producen colonias rosa o rojas que pueden estar rodeadas de una zona
de bilis.
Agar MH-IH
Es un medio de cultivo
enriquesido que se utiliza para el aislamiento de Legionella pneumophila.
Agar Mueller Hinton
Es un medio enriquecido
utilizado como medio de elección para realizar pruebas de sensibilidad a los
antimicrobianos.
Medio NYC
Es un medio recomendado para
el cultivo de especies exigentes de Neisseria como Neisseria gonorrhoeae y
Neisseria meningitidis.
Medio base de PPLO
Medio PPLO enriquesido se
utiliza para aislar a Mycoplasma.
Medio de Roiron
Es un medio utilizado para el
cultivo de Trichonomas vaginalis y especies del genero Candida. El medio lleva
incluido antivioticos para inhibir el desarrollo de las bacterias acompañantes.
Agar Sabouraud
Es un medio utilizado para el
cultivo de levaduras y hongos.
Agar Sabouraud Clorandenicol
Es un medio utilizado para el
cultivo de levaduras y hongos en el que se adiciona cloranfenicol para impedir
el desarrollo de la flora acopañante.
Agar Salmonella-Shigella(agar
SS)
Es un medio diferencial
selectivo utilizado para el aislamiento de Salmonella y Shigella.
El desarrollo de otros bacilos
gramnegativos y de cococ gran positivos esta inhibido por el verde brillante
las sales biliares y las elevadas concentraciones de tiosulfato y citrato.
Agar sangre
Es un medio enriquecido
utilizado para el cultivo de microorganismos exigentes adecuado para la
determinación de reacciones hemolíticas típicas.
Agar Schaedler
Es un medio utilizado para el cultivo
de bacterias anaerobias.
Caldo de selenito
Se utiliza para el
enqieusimiento de Salmonella. El selenito presente en el medio inhibe el
crecimiento de coliformes y enterococos en las primeras horas de incubación por
lo que no conviene prolongar los tiempos de incubación.
Agar Skirrow
Es un medio selctivo utilizado
para el aislamiento de Campylobacter. La selectividad del medio la proporciona
la adicion de antibióticos.
Agar TBS
(tiosulfato-citrato-bilis-sacarosa)
Es un medio selctivo utilizado
para el aislamiento de Vibrio.
Caldo de tetrationato
Es un medio selectivo
utilizado para el enriquecimiento de Salmonella.
Agar Thayer Martin
Permite el crecimiento de
cepas exigentes de Neisseria. El medio esta compuesto por una base tipo
Columbia adicionada de hemoglobina con suplemento rico en vitaminas y
aminoácidos y una mescla de antibióticos que inhibe a la flora acompañante.
Medio de Tinsdale
Es un medio utilizado para el
cultivo de Corynebacterium. El telurio incluido en el medio inhibe el crecimiento
de la flora acompañante.
Caldo de Todd-Hewitt
Medio descrito por Tod y
Hewitt en el que la presencia de glucosa favorece el crecimiento de
Streptococcus y permite la producción de hemolisiana estrectococica.
Caldo de triptosa
Es un caldo de enriquecimiento
de utilización general en microbiología. Esta indicado para la determinación de
la sensibilidad a los antibióticos por el método de las diluciones para la
realización de hemocultivos control de esterilidad, etc.
Agar V
El agar V es un medio
utilizado para el aislamiento de Gardnerella vaginalis.
Medio de wauters
Es un medio selectivo para el
aislamiento de Yersinia enterocolitica. El verde briilante incluido en el medio
inhibe el desarrollo de la flora gampositiva .
Medio de Wilkins y Chalgeren
Es un medio específicamente
recomendado para realizar las pruebas de susceptibilidad de bacterias
anaerobias por el método de dilución en agar.
Agar XLD
(xilosa-lisina-desoxicolato)
Es un medio selcticvo de
diferenciación formulado originalmente para el aislamiento de shiguella pero en
el también se obtienen buenos aislamientos de salmonella.
Control
de calidad de los medios emplacados
Con los medios de cultivo se
deben establecer tre tipos de controles antes de considerarlos aptos para
utilizar.
Control de esterilidad: se
efectua incubando algunas placas escogidas del lote al azar durante dos días a
35° C y 5 dias a temperatura ambiente.
Control de calidad: se realiza
para comprobar que el medio contiene aquellos componentes que los caracterizan.
Control de caducidad: para
ponerlo en practica es necesario que en el momento de emplaque se rotule en
algún lugar visible de la placa la fecha de preparación además del nombre del
medio.
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